ELISpots

Wydzielanie przeciwciał i cytokin po stymulacji antygenem komórki odpornościowej można wykryć za pomocą testu ELISPOT (test immunosorpcyjny związany z enzymem na miejscu). Technika ta jest zatem niezbędna do badania komórkowej odpowiedzi immunologicznej. Jest szczególnie wyróżniają ich czułości i możliwości wizualizacji rzadkich komórek specyficznych dla antygenu. Wykrywanie pojedynczych komórek przeprowadza się w populacji komórek monojądrzastych krwi obwodowej (ang. Jednojądrzaste komórki krwi, krótki PBMC).

Dla ELI spots, w które jest modyfikacją sandwich ELISA nieprzezroczystego membrany (przeważnie z PVDF) naniesionej na 96-studzienkowej płytce do mikromiareczkowania z pierwszym przeciwciało (mono- lub poliklonalne). Po tym następuje dodanie cytokiny lub wydzielające przeciwciała komórki odpornościowej, wraz z bodźcem (na przykład, antygenu lub peptydu). Epitopy wydzielanej z komórek stymulowanych immunologiczne białka są następnie selektywnie związany unieruchomionych przeciwciał wychwytujących (Engl. Przechwytywania przeciwciała). Sterylne roztwory lub FCS BSA służą do zablokowania niespecyficznych miejsc wiązania białka błony.

Celem ELI plam, wiązanie z unieruchomionym przeciwciałem, swoistym epitopem na wydzielanych cytokin lub przeciwciał. Po czym przeprowadza się inkubację w wilgotnym inkubatorze CO2 zbierania komórek i ostatecznie detekcji przeciwciałem detekcji. Do bezpośredniego wykrywania przeciwciała te są zwykle z fosfatazy alkalicznej (AP) lub peroksydaza chrzanowa (HRP), które mają mierzalną kolorymetrycznego efekt zmiany kolorów. Jednak stosowanie świetlówek znakowanych przeciwciał jest możliwe. W przypadku detekcji pośredniej przeciwciało skoniugowane z biotyną jest zwykle używany w wiążącego streptawidynę sprzężonego Reakcję enzymatyczną następujące analitu. Pojedyncze komórki reaktywne są następnie oznaczone przez punkt (Immunospot). Problemem jest to okres inkubacji nie wolna od wibracji może być jednak tutaj: Rzeczywista liczba plamek może, w wyniku ruchu poprzecznego komórek nie przylegających (zawiesina komórek) niższy na szok gdy odnotowana liczba miejsce.

Ocenę prób ELI spots, może być przeprowadzone zgodnie z wydzielanych cytokin lub przeciwciał, o wysokiej lub w zależności od liczby znakowanych komórek, tak ilościowo. Można to zrobić zarówno ręcznie jak i za pomocą odpowiedniego czytnika.