Elisa

W dziedzinie badań immunologicznych ELISA (enzymatyczny test immunosorpcyjny) do wykrywania i ewentualnie do określenia stężenia białka i wirusów, lub związki o małej masie cząsteczkowej, takich jak hormony, pestycydy i toksyn w próbce.

Charakterystyczne dla testow enzymów t immunologicznych (EIA) są wydzielenie próbki (analitu Przeciwciała lub antygeny), które mogą być związane przez specyficzne przeciwciała unieruchomionego na stałym podłożu, takim jak polistyren wielostudzienkowej płytce. Podstawa pomyślnego testu ELISA jest wiązanie epitopów z sekwencji aminokwasowej antygenu i odpowiedniego przeciwciała specyficzne. Te ostatnie mogą być zarówno z pochodzenia monoklonaler- i poliklonalne. Przeciwciała monoklonalne pochodzące z tak zwanych komórek hybrydom, i wiążą się bardzo specyficznego epitopu, podczas gdy przeciwciała poliklonalne różnych epitopów antygenu wiązania i rzeczywiste mieszaniny różnych przeciwciał, które zostały oczyszczone z surowicy zwierzęcej reprezentować. poliklonalne we wtórnym wykrywania analitu korzystnie stosuje się w testach ELISA pośrednich. Monoklonalne przeciwciała są stosowane od analitu, który ma być badane głównie w podstawowym wykrywania i wiązania antygenu ze względu na swoją specyficzność dla określonego epitopu. Stężenie analitu może być ostatecznie ustalona za pomocą reakcji barwnej i analizowano ilościowo. Jego łatwa obsługa i szybkość one zastąpiły radioimmunologiczną.

Jako pierwsze, cienka folia z specyficznym przeciwciałem, lub antygenem jest dołączony do polistyrenowej płytki wielostudzienkowej dla pomyślnego wykonania testu ELISA. Po etapie blokowania w którym jeszcze niezwiązanych miejsc objętych płyty, wykrywanie analitu, a następnie przeciwciała lub antygenu sprzężone z enzymem, który specyficznie wiąże się z tej cienkiej powłoki. W celu uzyskania sygnału pomiaru związanego analit, substrat dodaje się, co w wyniku reakcji z sprzężony z enzymem przeciwciała lub antygenu, co skutkuje zmianą koloru. Podczas realizacji tego testu ELISA, etapy przemywania pomiędzy procesami w celu optymalnego wykorzystywania sygnałów są szczególnie ważne.

Ponadto formaty testów mogą być wykonane pomiędzy czterema ELISA: bezpośrednie, pośrednie ELISA, kanapkowa ELISA i konkurencyjnych lub hamujących testów ELISA.

W przypadku bezpośredniego testu ELISA, odpowiedniego antygenu albo analit jest wykrywany przy użyciu sprzężonego bezpośrednio z przeciwciałem enzymatycznej. Mniej powszechne, ale nadal wykorzystywane, że jest dokładnie odwrotnie: specyficznym przeciwciałem jest dołączony do wielu studzienkach i znakowany antygen jest używany do wykrywania. Korzyści wynikające z bezpośredniego testu ELISA są jego prędkość i rzadziej zawodzą, ponieważ liczba etapów i odczynników stosowanych w przeciwieństwie do poniższych możliwości są ograniczone.

Format testów ELISA pośrednich początkowo wykorzystuje nieoznakowanego pierwsze przeciwciało, które specyficznie wiąże się z antygenem, który ma być wykryty. Jest to związane w drugim etapie za pomocą poliklonalnego przeciwciała wtórne sprzężone z enzymem, który jest skierowany przeciwko określonego gatunku (na przykład, anty-mysie). Wśród korzyści wynikających z testów ELISA pośrednich obejmują zwiększania jego czułości, elastyczność i niższe koszty ze względu na mniejszą liczbę sprzężonych przeciwciał.

W teście kanapkowym ELISA dwa przeciwciała wiążą się z dwoma różnymi niepokrywające epitopy analitu tak, że analit wiąże jak wielowarstwowe z obu stron. W tym celu, warstwa polistyrenowa z pierwszym przeciwciałem ( „przechwytywania przeciwciała”) jest pokryta. Gdy próbka jest dodawana do analitu, który ma być wykryty, następuje inkubacja z wtórnym przeciwciałem ( „wykrywanie przeciwciał”), w celu określenia stężenia analitu obecnego. Tutaj znowu między bezpośrednim sandwich ELISA, w którym „wykrywanie przeciwciał” sprzęga się z enzymem i wielowarstwowe pośredniej ELISA, w „Detection przeciwciało” niesprzężone, różnią się. Ta ostatnia metoda, jednakże, wymagają dodatkowego skoniugowane przeciwciało wtórne do pomiaru. Podobnie jak w przypadku pośredniego testu ELISA zalety kanapkowym teście ELISA jest jego elastyczność i czułość. Poza tym jest również możliwe wykrywanie złożonych próbek, bez uprzedniego oczyszczania, specjalnie.

Konkurencyjne testy ELISA (jak określono testem ELISA), testy hamujące wykrywanie stężenia analitu (przeciwciała lub antygenu), w próbce do badania przez oddziaływanie na sygnał do przewidzenia lub przeszkadzać. Za pomocą tego sposobu jest często, gdy tylko jedno przeciwciało o konkretnym antygenem jest dostępna lub wiązania analitu jest zbyt mała, aby związanie dwóch przeciwciał. podczas gdy wcześniej opisane pomiędzy testem ELISA wybrano trzy formatu jako podstawy. W przypadku bezpośredniego wersji testu ELISA, antygen z powlekanego antygenu na płytce wielostudzienkowej, że jeżeli są one zgodne, na wiązanie się przeciwciała „Detection” rywalizacji (o konkursie: Engl konkurencji zawodów.). W ten sposób sygnał w teście byłyby w znacznym stopniu zredukowane, w przypadku wysokich stężeń antygenu w próbce, jak to zostanie usunięta w etapie przemywania, kompleks antygenu próbki i „wykrywanie przeciwciał” z testu. Tutaj też może być podzielony między bezpośrednio i pośrednio w zależności od koniugacji „Wykrywanie przeciwciał”.

Fosfatazy alkalicznej (AP) i peroksydazę chrzanową są szeroko stosowane w przypadku bezpośredniego wykrywania (HRP), z których obydwa prowadzą do mierzalnej kolorymetryczną zmianę kolorów. Oprócz tej analizy za pomocą spektrofotometru jednak, że wybór może spaść na fluorescencyjnie znakowanych przeciwciał. W przypadku detekcji pośredniej przeciwciało skoniugowane z biotyną jest zwykle używany w wiążącego streptawidynę sprzężonego Reakcję enzymatyczną następujące analitu.

Porównując sygnał w teście z krzywej standardowej, wynik pomiaru może być oceniona ilościowo i niniejszy stężenie antygenu jest dokładnie określone, a następnie. Jakości, to znaczy, czy konkretny antygen w próbce są obecne, mogą być badane. Wykres danych ELISA przeprowadzono przez zastosowanie gęstości optycznej w stosunku do logarytmu stężenia, tak, że otrzymany krzywa w formie sigmoidalnej. Przez porównanie z liniowej części tej krzywej sigmoidalnej krzywej standardowej, albo ręcznie albo za pomocą oprogramowania dostarczonego przez czytnik ELISA Platten stężenie w badanej próbce można odczytać.

Oprócz wyżej opisanych formatów oferujemy dla kolorymetrii oceny i chemiluminescencji, a także w doborze rodzaju próbek, zakres jest bardzo zróżnicowany (od jak surowica, osocze, płyny ustrojowe, takie jak mocz, nadsącze hodowli komórek do komórek i tkanek lizatów). Take w poszukiwaniu odpowiedniego zestawu ELISA opcje filtru na lewej stronie, aby zawęzić wyszukiwanie do pewnych specyficznych, producentów, aplikacje Ursprungsspezien i izotypów. Potrzebują Państwo więcej informacji zapraszamy do skorzystania z naszej obsługi klienta, który jest dostępny za pośrednictwem czatu, poczty elektronicznej lub telefonicznie.